ADN RECOMBINANTE

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Las bacterias sufren recombinaciones genéticas naturales que permiten la transferencia de genes entre especies no análogas, por medio del proceso de TRANSFORMACIÓN, permitiendo así que las bacterias capturen el DNA desnudo que se encuentra en el ambiente y lo incorporan en sus genomas penetrando por su pared desde el medio externo. La recombinación genética tiene lugar entre el ADN transformante y el ADN de la bacteria receptora, de esta manera las bacterias pueden capturar plásmidos (molécula pequeña de ADN circular), y cuando la misma muere el DNA liberado al ambiente puede ser capturado por otras bacterias (1).

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL

• Tema: Clonación y expresión de la conotoxina recombinante cal26a de Conus californicus en Escherichia coli. 
• Objetivo: Obtener la conotoxina cal26a de manera recombinante en E. coli para su análisis de actividad, así como para su posterior empleo en estudios de estructura y caracterización de blancos moleculares, entre otros. 
• Gen o secuencia a clonar: Gen que codifica para la conotoxina cal26a. Enzimas de restricción:  Nco I y Xho I (Promega). 
• Enzima ligasa: T4 DNA ligasa (Promega) la cual une las regiones complementarias de los sitios de corte de las enzimas de restricción. 
• Vector: Vector de expresión pET22b(+) (Novagen). 
• Célula receptora: Transformación (procariota)- células de E. coli BL21 (DE3) 

• Mecanismo de transferencia o inserción del gen:  Conjugación por electroporador MicroPulse 
• Método de identificación de clones: electroforesis preparativa en gel de agarosa, Electroforesis del PCR de colonia de E. coli BL21, espectrofotometría, PCR, secuenciación, cultivo, Mapa del vector de expresión pET-22b(+) (2).

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Microbiología médica.9aed. España: Elsevier;2017. 137-141p. 
2. Bulbarela JG. Clonación y expresión de la conotoxina recombinante cal26a de Conus californicus en Escherichia coli [Internet]. [Ensenada, Baja California, México]: intro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada; 2017 [citado el 23 de enero de 2023]. Disponible en: https://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/bitstream/1007/657/1/242751.pdf